martes, 12 de diciembre de 2017

MEDIOS DE INCLUSION HIDROSOLUBLES PARA CORTES VEGETALES


REVISIÓN DE MEDIOS DE MONTAJE HIDROSOLUBLES 
PARA  CONSERVAR LA TINCIÓN DE CORTES VEGETALES CON SAFRANINA 0,2% ACUOSA




La Safranina en medio acuoso tiñe metacromáticamente:
Las ligninas quedan de color rojo intenso, y las celulosas amarillo-anaranjadas. Las cutinas suelen quedar amarillo intenso y las pectinas pardo -anaranjadas. Todo ello en función de intensidad de coloración (tiempo y concentración) y composición del material.

Si se lava mucho, se llega a perder la coloración de las zonas no lignificadas.

Pero esa coloración cambia a tonos fucsia en cuanto cambiamos el medio por uno de base alcohólica.

He intentado “perpetuar” esta tinción (la acuosa) montando en distintos medios hidrosolubles, pero siempre con poco éxito. Prácticamente solo resiste en agua, como veremos a continuación.

Entre mediados de noviembre y mediados de diciembre del presente año, he hecho pruebas de inclusión en los siguientes medios, con los resultados que indico:



1.- AGUA:
Cementando el cubre con:
       Bálsamo del Canadá
       Cola de contacto
       Pegamento universal Supertite
       Laca de uñas

Ninguno de los cuatro superó las 48 horas de eficacia en lo que se refiere a estanqueidad total y por consiguiente , evitar la formación de burbujas de aire que arruinen la preparación. La conservación de los colores es excelente.


2.- SECADO EN ESTUFA y MONTAJE EN BÁLSAMO:

Cambia el color, virando hacia tonos fucsia, quedando las ligninas moradas y las celulosas rosadas.




3.- GLICERINA:

Destiñe a los pocos minutos. Creo que el desteñido es aplicable a todos los medios de inclusión que contengan glicerina.


4.- ALCOHOL POLIVINÍLICO:

Destiñe, se forma burbuja gaseosa central y queda un fondo general teñido de rosa.


5.- FARRANT (Goma- Glicerina)

Destiñe.


6.- MIEL:

Destiñe


7.- IMEDIO BANDA AZUL:

Destiñe


8.- POLIVINILPIRROLIDONA:

Se hicieron pruebas con la PVP disuelta en soluciones de pH 7, 9 y 11, destiñendo en todas ellas, aunque menos cuanto más elevado era el pH.


(La coloración no es de Safranina, pero el DESASTRE sí es de PVP)



9.- CARBOXIMETILCELULOSA:

En principio respeta los colores, pero pasadas unas horas se producen fuertes retracciones. Se repitió con otro gel más concentrado en CMC, y cementando cuidadosamente los bordes con Bálsamo, pero a las 24 horas las retracciones arruinan la preparación. A los pocos días desaparecen todos los amarillos, quedando solo un tono rosado:


10.- ACETATO DE POLIVINILO:

Destiñe inmediatamente.


11.- SILICATO SÓDICO:

Respeta los colores y sufre muy poca retracción. Tiene el inconveniente de un secado muy rápido, con lo que si se forma alguna burbuja es muy difícil eliminarla. (Se evita en parte este problema mezclando cuidadosamente el silicato con el agua que lleve la muestra, antes de poner el cubreobjetos.)
Destiñe mínimamente, casi imperceptible, y la estabilidad es buena, al menos en los primeros quince días. Dado que el secado es muy rápido y aparentemente total, es probable que la estabilidad perdure en el tiempo.

Aquí pueden observarse los distintos tonos de la coloración metacromática según la composición de las paredes celulares.

12.- BARNIZ “ACUALUX” DE TITANLUX:

Destiñe.




13.- METILCELULOSA:

Respeta inicialmente los colores. Presenta problemas para evitar la entrada de aire entre porta y cubre, y a las pocas horas destiñe y produce contracciones (menores que la CMC pero que invalidan la preparación):





He intentado usar barnices acrílicos (Paraloid) y poliuretánicos para hacer estas inclusiones, pero los que he encontrado no son disoluciones sino dispersiones en agua.





CONCLUSIONES PROVISIONALES:

Únicamente el Agua y el Silicato Sódico soportan la coloración.

El Agua puede servir como medio temporal, fotografiando antes de que se evapore, ya que hasta ahora no he encontrado método eficaz de cementado que permita conservar más de un día.

El Silicato sódico parece ser el único medio de inclusión eficaz para esta coloración, y candidato a conservarse un tiempo prudencial. 

Conserva bien los distintos colores "metacromáticos".

Si se conserva en el tiempo, puede servir como medio acuoso para coloraciones en las que no interesa pasar a medio alcohólico, cosa necesaria si se quiere incluir en resinas. Puede por ejemplo sustituir a la Goma  Arábiga en la inclusión por el método “Pujiula” (incluir en Goma, dejar secar y añadir Bálsamo antes de cubrir). Pero ¡ojo!: he hecho la prueba con Verde Brillante y Rojo Congo y en breve tiempo desaparece el verde. Hay que buscar por tanto colorantes adecuados que no se afecten por el Silicato.

Me inquieta constatar que nuestro malogrado maestro Walter Dioni no mencionó nunca (hasta donde yo he podido encontrar) el Silicato como medio de montaje acuoso. ¿No lo tuvo a mano? ¿Lo probó y no le gustó? ¡Lástima no poder comentarlo con él, que tanto nos enseñó!


                                                          AGS , Diciembre 2017.

miércoles, 15 de febrero de 2017

SEGUIMIENTO DE MEZCLAS BINARIAS COLORANTES

SAVI-01 continúa tiñendo después de tres años de fabricado.
Ha disminuido algo la fuerza de color rojo y quizá también algo el verde-azulado, pero tres años parece suficiente para una mezcla colorante.


SASIP continúa precipitando. Como no dispongo de Azul de Astra en polvo, no puedo evaluar otras mezclas de composición totalmente conocida por mí.

Aunque sigue tiñendo (el filtrado) correctamente, prefiero desecharlo.


Algo similar ocurre con SAAS, que en solo un mes presenta ya precipitado, similar (agujas) al de SASIP.



Paso pues a cambiar la Safranina por Fucsina, ya que de todas formas no es posible gozar del bonito color rojo de la safranina en cuanto la ponemos en medio alcohólico, donde pasa a un tono fucsia.



La nueva mezcla es:


Fucsina básica 0.5% en agua
Azul de Astra (Euromex)
A partes iguales.


De momento no precipita, y tiñe en unos 5 minutos correctamente.

Véase ejemplo:





Tinciones similares las he visto en la bibliografía ( p. ej. Luque et al. 1996 Acta Botanica Brasileña) , pero no con coloración simultánea sino con dobles coloraciones.


Veremos cual es el comportamiento de esta nueva  mezcla con el tiempo, que de momento bautizo como FA-11. (Fucsina - Astra a partes iguales en volumen)

lunes, 9 de enero de 2017

SAVI, SASIP y SAS



 El colorante SAVI 01 ya lleva tres años funcionando sin problemas.

Como posible defecto se podría aducir que el color verde-azulado que toma la celulosa no es muy intenso y que el color rojo de la lignina es rojo-fucsia.

En este tiempo he ido probando mezclas que tambien sirven para dar en un solo paso tinciones diferenciales, es decir, un color para las ligninas y otro distinto para las celulosas.

Cambié el Verde Rápido por Azul de Astra, que produce azules más intensos. Este tipo de mezclas se vienen denominando en muchas referencias (sobre todo portuguesas y brasileñas) como “Safrablau”. Las concentraciones y los disolventes empleados son distintos según los autores.

Empecé empleando Isopropanol como disolvente (ya que normalmente es más “amable” que otros alcoholes), por lo que bauticé a esas mezclas con el nombre de SASIP (Safranina-Astra-Isopropanol).

El resultado, después de bastantes pruebas, ha sido satisfactorio, como puede comprobarse en los siguientes ejemplos:

Digitalis thapsi (hoja tr)   Tinción SASIP





Tomate (tallo tr)  Tinción SASIP


Mercurialis tomentosa (tallo tr)  Tinción SASIP



No obstante, todos los SASIP probados tienen el inconveniente de producir un precipitado en forma de agujas pardas que obliga a filtrar la mezcla. Aunque el filtrado es totalmente válido (ver los ejemplos anteriores) no es fisico-quimicamente muy ortodoxo. Ello me ha llevado abandonar el Isopropanol y probar como disolvente de estas mezclas el Etanol.

Después de varias pruebas he llegado a una mezcla que considero satisfactoria, sin precipitados, en medio hidro-alcohólico y que denomino SAS.

Como no dispongo de otro Azul de Astra que el proporcionado por Euromex, y de momento ignoro tanto el disolvente como la proporción colorante-disolvente, formulo mi SAS de la siguiente manera:

MEZCLAR:

1 volumen de SAFRANINA 0,2 % en mezcla a partes iguales de  Agua-Etanol
1 volumen de AZUL de ASTRA “Euromex”


Habrá que dejar transcurrir unos meses para comprobar el comportamiento, pero de momento no se le ve intención de precipitar ni estropearse.

Los resultados son similares a los de los SASIP, como puede comprobarse en el siguiente ejemplo:


Hinojo (tallo tr)   Tinción SAS



Todos los ejemplos se han hecho con cortes realizados con el MICROTOMO ESTOCÁSTICO (ver entrada anterior del Blog).
 El corte de Digital se ha realizado a partir de una muestra seca de mi herbario ¡ del año 1.993 ! humedeciendo la muestra en alcohol de 70º  previamente a realizar los cortes.


El resultado, como puede verse es: Lignina rojo; Celulosa y pectinas azul.


El  MODUS OPERANDI  queda así de sencillo: 

- Corte en agua (si se quiere se puede tratar antes por hipoclorito para "vaciar" contenidos celulares y destacar más las paredes)

- SAS,  unos 5 minutos

- Lavado en agua

- IPA hasta no cesión de color (no lavar con Etanol, pues se llevará parte de la Safranina)

- Montar en Laca de uñas (también admite montaje en resinas).