Hoy toca observar tricomas
Es decir, pelos. Los pelos de los vegetales, que tienen la misma
función que los pelos en los animales: la protección.
Protección frente a luz, a viento, a frío, a herbívoros, a
insectos, artrópodos o gusanos que intenten penetrar para vivir o
para desovar...
Pelos los tienen muchos vegetales, y no todos son iguales. Los hay
tectores, glandulosos, lisos, rugosos, ramificados, mono y
pluricelulares, estrellados...
Por eso vale la pena observarlos al microscopio.
Lo mejor será observarlos in situ, en la misma planta,
ya que así se aprecia también su arranque, el lugar donde se
implantan, que suele tener un grupo de células diferentes del resto,
pero habremos de acercarnos bastante ya que su tamaño suele ser
pequeño. Nos movemos en las escalas propias de la fotografía
cercana (eso que llaman close-up) y de la macrofotografía, cuando no
en la fotomicrografía.
Los podemos observar sin teñir
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| Mercurialis tomentosa sin teñir |
Se pueden ver bien en cortes gruesos, que podemos
realizar a mano con facilidad, tanto en tallos como en hojas. En los
bordes de los cortes transversales podremos observar, en distintos planos, los tricomas. No podremos enfocar todos a la vez, ya que el
corte es grueso, pero lo que interesa es poder recrearnos en la
observación de cada uno por separado
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| Corte transversal de tallo de Veronica |
También es interesante la observación con luz incidente,
bien con la ayuda de un estereomicroscopio de pocos aumentos o bien
fotografiándolos con los móviles actuales, que son capaces de
enfocar a pocos centímetros.
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| Superficie de hoja de Lavandula (se ven también glándulas de esencia redondeadas amarillas) |
Podemos observarlos teñidos. Como
suelen resistirse a tomar los colorantes, la parte parenquimatosa del
corte quedará sobre-teñida, cosa que no nos importa ya que nuestra
atención se dirige a los tricomas.
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| Pelo tector y glanduloso de Pelargonium (Azul de Metileno) |
Puede interesar algunas veces observar los pelos individualizados,
arrancados de su sitio.
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| Pelo tector rugoso de Origanum |
Pasemos ahora a los MODUS OPERANDI para realizar lo arriba indicado.
Tres métodos:
A) Por fotografía cercana
B) En cortes transversales (al aire, en líquido o teñidos)
C) Individualizados (arrancados)
Tres métodos:
A) Por fotografía cercana
B) En cortes transversales (al aire, en líquido o teñidos)
C) Individualizados (arrancados)
Veamos cada uno de ellos:
A) FOTOGRAFÍA CERCANA:
Hoy en día se puede hacer con facilidad con los nuevos móviles, que
fotografían a distancias muy cortas (entre 5 y 10 cm). Lo
interesante es dar con la iluminación adecuada que resalte lo que se
quiera observar en la muestra.
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| Haz de hoja de Veronica (foto con móvil) |
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| Haz de hoja de Oxalis (foto con móvil) |
Una caja o un vaso puede ser un soporte válido para sostener el
móvil.
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| Móvil sobre un vaso fotografiando una hoja (así nos ahorramos comprar soportes sofisticadísimos...) |
La iluminación se puede intentar con una linterna o un pequeño
“flexo”. (También hay iluminadores muy buenos si queremos
gastarnos las perras...). La iluminación se ha de hacer a base de
pruebas, pero siempre será bueno efectuar iluminaciones laterales
que incrementen el relieve.
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| Tallo de Veronica (luz incidente) |
Es conveniente que el móvil permita ajustar MANUALMENTE su cámara,
aunque a veces los métodos automáticos son válidos. Para evitar
vibraciones podemos usar el disparo diferido unos segundos.
Las muestras deberán ser “frescas” para que los tricomas no
hayan perdido su turgencia y por lo tanto mantengan su natural porte.
B) EN CORTES:
Se realiza, a mano alzada, un corte transversal de tallo u hoja, y se
deposita sobre un porta.
B-1: al aire
Se puede hacer la observación AL AIRE (incluso sin poner cubre),
que será la manera más natural de observación.
La observación se puede hacer con luz incidente y fondo claro o
fondo oscuro, o también con luz transmitida (la del iluminador del
microscopio).
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| Pelos glandulosos de Antirrhinum (fondo oscuro, luz lateral) |
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| Pelos tectores y glandulosos de Pelargonium en corte transversal grueso, luz transmitida. |
Este sistema tiene el inconveniente de ser un método TEMPORAL, ya
que antes o después el corte se deteriora
B-2: en medio líquido
Se puede sumergir el corte ( y por tanto los pelos) en un líquido y
cubrir con el correspondiente cubreobjetos. El agua y los líquidos
no oleosos (glicerina, goma arábiga...) darán más contraste que
los oleosos (alcoholes, resinas...). Si se quiere hacer una
preparación permanente, habrá que proceder a FIJAR el corte y por
tanto es necesario añadir alcohol u otro fijador. Esto puede
deteriorar (o no) los tricomas. Muchas veces estas manipulaciones
hacen que “exploten” y se deshinchen las células glandulosas redondas.
Una vez fijado, se puede incluir el corte. Si se hace en agua habrá
que sellar los bordes del cubre con laca para evitar que el agua se
evapore. El agua como medio de inclusión casi siempre genera
burbujas que acostumbran a colocarse en los lugares más inoportunos (ver foto de Romero al final). Mejor es incluir en laca o resinas, pero en este caso el contraste se
reduce mucho y es necesario teñir, cosa de la que nos ocupamos
enseguida. Un sistema intermedio es incluir en medios acuosos que
secan después, como Apathy o Farrán.
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| Pelargonium en medio acuoso, luz transmitida. |
B-3: tiñendo
La tinción del corte (con los pelos) se hace como siempre por
inmersión en el colorante (luego enumeraremos algunos). Normalmente
se ha de prolongar el tiempo de inmersión ya que los tricomas son
reacios a tomar color. No solo reacios sino también irregulares en
la coloración, ya que en un mismo campo podemos tener a veces pelos
teñidos y pelos no teñidos, aún tratándose de pelos de una misma
planta y tipo, e incluso parte del pelo teñido de un color y parte de otro color.
Al prolongar el tiempo de tinción (ya se ha apuntado antes) el
parénquima del corte quedará sobre-tintado, dado que además no
hemos tenido especial cuidado en hacer cortes finos.
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| Pelargonium, Azul de metileno. Pelos tectores largos y pequeños pelos glandulosos. Corte grueso. |
Lavaremos con disolvente adecuado hasta no cesión y montaremos en
laca o resina.
C) INDIVIDUALMENTE:
Si queremos observar los pelos individualmente, podemos proceder a
raspar con una cuchilla o lanceta la superficie de la planta,
haciendo caer los pelos sobre un porta horizontal. Esta operación es
relativamente fácil con pelos rígidos pero difícil con pelos
blandos y largos: rascaremos la superficie y los pelos se “peinarán”
y acomodarán al paso de la cuchilla para luego volver a la posición
original sin caer al porta.
Este método tiene el inconveniente de ver solo el pelo una vez arrancado sin observar su inserción en la planta, que suele ser interesante.
Este método tiene el inconveniente de ver solo el pelo una vez arrancado sin observar su inserción en la planta, que suele ser interesante.
Una vez hemos conseguido un montoncito de pelos en el porta (habrá
que recuperar los que se empeñan en pegarse a la cuchilla), podemos
poner encima una gota de colorante y colocar el cubre.
Dejamos actuar unos minutos (normalmente más de los que pensábamos)
y ahora debemos sustituir el colorante por disolvente incoloro.
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| Modo de introducir líquido por la derecha mientras se extrae por la izquierda con el papel de filtro. |
Lo
“chuparemos” por capilaridad por un lado del cubre con un trocito
de papel de filtro mientras por el otro lado agregamos gotas de
disolvente (agua, alcohol...). Normalmente los tricomas aguantan sin
escaparse hacia el papel de filtro.
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| Pelo estrellado. Tinción con Safranina. Luz transmitida. |
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| Pelo estrellado. Tinción Verde Malaquita. Luz transmitida. |
Si el colorante no es muy oscuro puede obviarse la operación
anterior, y puede que el colorante acabe por concentrarse en los
tricomas dejando el resto del campo casi sin color.
Una vez sustituido el colorante por disolvente se puede optar por:
a) Sellar con laca (Ya se comentó antes el inconveniente del agua
como medio permanente.)
b) Sustituir el disolvente por un medio de montaje definitivo
valiéndonos del mismo método: “chupar” por un lado mientras
aportamos disolvente por el opuesto. Como los medios de montaje suelen ser viscosos, podemos usar medios diluidos con el disolvente adecuado:
IPA para Laca; Xilol para Bálsamo.
El cubreobjetos puede mantenerse fijo aplicando en su centro un
pequeño peso: pesita de 2 gramos, tornillo, etc.
En algunos casos (SOLO SI SON PELOS GRANDES Y ABUNDANTES) puede
intentarse el método consistente en teñir en el hueco de una placa de
gotas o similar y después “colar” los pelos teñidos por un
colador que habremos fabricado pegando un trozo de gasa muy fina en
un alvéolo de un blister de los que contienen los comprimidos o algo
similar. Mejor que gasa es un trozo de media o “panty” vieja (también sirve una nueva pero es más caro). Para evitar manchas será
bueno recoger los líquidos de lavado en un frasquito y luego
tirarlos al sumidero debidamente.
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| "Colador" hecho con trozo de media y alveolo de blister de comprimidos. |
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| "Colador" y frasco "sumidero". |
Los tricomas se lavan sobre el mismo “colador” con el disolvente adecuado y se
recuperan los pelos teñidos a favor de un pincelito, depositándolos
en un porta y tratándolos como antes se ha dicho.
En todos los procesos explicados es fundamental estar muy atento a
corrientes de aire, estornudos, suspiros, etc., que pueden dar al
traste con nuestra preparación. Lo mejor es no respirar...
¡pero es
que nos va la vida en ello... !
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COLORANTES:
Con los colorantes habituales tendremos cubierta toda la gama
apetecible, ya que, insistiendo más o menos, acabarán tiñéndose
lo suficiente. (Algunos se resisten bastante).
Verde: Con Verde Brillante, Verde Malaquita, Verde
Yodo
Azul: Con Azul de Metileno, Azul de Astra, Azul de Toluidina
Rojo: Con Safranina
Morado: Con Hematoxilina, Violeta de Genciana, Fucsina básica
Con estos colorantes se pueden teñir (o intentarlo) los cortes y/o tricomas antes
citados. El tiempo de tinción, dependiendo del colorante, puede ser
alto, mayor de cinco minutos, con lo que el corte quedará oscurísimo
(ya hemos dicho que son cortes gruesos) pero lo que nos interesa son
los pelos.
Concentraciones:
Conviene usar concentraciones altas (1%) y será necesario prolongar
los tiempos (10 min). La consecuencia lógica es que habrá que
insistir en los lavados para que deje de haber cesión de colorante.
Mezclas de colorantes:
Los ya conocidos en este blog:
SAVI: Safranina y Verde Rápido
FA 11: Fucsina acuosa y Azul Astra
Algunas plantas de fácil localización que ofrecen tricomas
interesantes:
Lavandula: lavanda, espliego
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| Sin teñir |
Pelargonium: los geranios de los tiestos decorativos
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| Azul de Metileno |
Rosmarinus: romero
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| Safranina. La región inferior es una burbuja, en la que condensan pequeñas gotitas de agua, |
Antirrhinum: conejitos o dragoncillos
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| Luz transmitida. Sombras y suciedad, ya que los "conejitos" son bastante pringosos. |
Quercus: encina
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| Tinción SASIP. Abajo, en el envés, los tricomas, de perfil y caprichosamente teñidos. Corte de transversal de hoja |
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| Sin tinción |
Verbascum: gordolobo
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| Envés de hoja. Luz incidente. |
Olea: olivo
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| Corte de tallo. Tinción FA 11. El pelo del círculo rojo se observa de perfil. |
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| El pelo de Olea es el central redondeado, visto de frente. El largo es de Mercurialis, ligeramente teñido de Safranina. Los otros son de Lavandula. |
También se puede disfrutar de los tricomas sin teñir
visualizándolos con ayuda de la POLARIZACIÓN, pero eso a lo mejor
lo tratamos otro día, con más calma...
(Todas las fotografías, y sus correspondientes preparaciones y tinciones, son del autor).
